NEUBAUERA KAMERA: VĒSTURE, ĪPAŠĪBAS, LIETOJUMI - BIOLOĢIJA - 2025

Neubauer kamera , hematometer vai hemocytometer, ir laboratorijas instruments, kas sastāv no īpaša bieza stikla plāksnes. Šo kameru izmanto dažu šūnu tipu, piemēram, sarkano asins šūnu, balto asins šūnu un trombocītu, skaitīšanai, lai gan to var izmantot sporu, spermas, parazītu utt.

Tam ir dažas ļoti savdabīgas īpašības, jo tas sastāv no 3 zonām, centrālās skaitīšanas un divām atbalsta zonām. Katrā kamerā ir divas skaitīšanas zonas vai šķērssijas, viena augšā un otra apakšā.

Neubauera kamera. Avots: SantiBadia. Rediģēts attēls.

Tīkla formā tām ir vairākas dalīšanas. Skaitīšanas laukumi ir vidējie kvadrāti, kas atrodami abu riņķu 4 stūros, kā arī centrālais kvadrāts.

Kameras montāža jāveic ļoti uzmanīgi, jo jebkura detaļa ietekmē šūnu skaitu. Var pieļaut daudz kļūdu, taču, ja rodas kāda no tām, kamera ir jāizjauc, jātīra un jāapmontē atkārtoti. Galvenās kļūdas ir šādas:

Pārpildot kameru vai nepietiekami piepildot to, ļaujot tai nožūt, mēģinot noņemt lieko šķidrumu ar marli, noliecot kameru to pārvadājot, piepildot netīro vai mitro kameru, nesajaucot atšķaidījumu vai paraugu, cita starpā. Visas šīs kļūdas radīs nereālu vērtību.

Vēsture

Neubauera kamera ir precīza ierīce, un ražošanas process tiek stingri kontrolēts. Tas tika izveidots, lai precīzi saskaitītu daļiņas vai veidotos elementus uz mm ³ , piemēram, šūnas dažādos šķidrumos. Tā smalkā grafika ir cirsta ar dimanta zīmuli.

Neubauera kameras raksturojums

Visa kamera ir parastā priekšmetstikla izmērs, lai to varētu novietot uz mikroskopa skatuves.

Kamera sastāv no trim centrālām taisnstūra virsmām (a, b, c). Zonā “b” atrodas R zona vai skaitīšanas zona, ko sauc arī par retikulumu. Viens katrā kameras pusē, atdalīts ar zonu "d".

Neubauera palātas grafiskā diagramma. Avots: Hematoloģijas praktiskais ceļvedis. Karabobo universitātes Bioanalīzes skola, Venecuēla.

Katra režģis ir slīpēts laukums, kurā ir iegravēts skaitīšanas laukums. Tas sastāv no kvadrāta ar virsmas laukumu 9 mm ² un ir iekšēji sadalīts 9 kvadrātos ar virsmas laukumu 1 mm ² katrā. Četrus stūra kvadrātus sadala 16 mazākos kvadrātos (0,0625 mm ² platībā).

Šos režģus veido virkne milimetru līniju, kas krustojas viens ar otru, veidojot perfekti satvertus režģus, kas norobežojas no noteiktajiem mērījumiem. Šīs līnijas ir iegravētas ar dimanta galu.

Uzlabota Neubauera retikula. Avots: Karabobo Universitātes, Venecuēla, Bioanalīzes skolas hematoloģijas praktiskais ceļvedis.

Četras malas atbilst skaitīšanas laukumam. Tieši šajās pusēs vai stūros tiek saskaitīta lielākā daļa šūnu (sarkanās asins šūnas un leikocīti), bet trombocīti tiek uzskaitīti centrālajā zonā.

Centrālajai zonai ir vairāk sadalījumu, tā sastāv no 1 mm ² kvadrāta, kas sadalīts 25 kvadrātos, kuru virsmas laukums ir 0,04 mm ² . Tie, savukārt, ir sadalīti 16 režģos ar platību 0,0025 mm ² .

Uzlabotā Neubauera retikula apraksts. a) Stūru kvadrāts, b) centrālais kvadrāts, c) centrālā laukuma vidējais kvadrāts. Avots: Karabobo Universitātes, Venecuēla, Bioanalīzes skolas hematoloģijas praktiskais ceļvedis.

Zonas “a” un “c” kalpo par atbalstu īpaša vāka objekta, ko sauc par hematometrisko priekšmetstikliņu vai hematimetra apvalku, novietošanai.

Augstums starp foliju un skaitīšanas virsmu ir 0,1 mm. Galīgo aprēķinu veikšanai nepieciešamie ir mērījumu kārbu virsmas laukuma, kā arī kameras augstuma un parauga atšķaidījuma mērījumi.

Lietojumprogrammas

To izmanto šūnu skaitīšanai. Tas ir īpaši noderīgi hematoloģijas jomā, jo tas ļauj saskaitīt 3 asins šūnu sērijas; ti, sarkanās asins šūnas, baltās asins šūnas un trombocīti.

Tomēr to var izmantot citās jomās, piemēram, spermas, sporu, baktēriju vai citu svarīgu priekšmetu skaita noteikšanai atkarībā no parauga veida.

Kā izmantot?

Parauga sagatavošana

Lai veiktu šūnu skaitīšanu, to parasti sāk ar iepriekšēju atšķaidīšanu. Piemērs: lai saskaitītu balto asins šūnu daudzumu, sagatavo 1:20 atšķaidījumu ar Turk šķidrumu. Pirms pipetes ievietošanas un Neubauera kameras uzstādīšanas atšķaidījumu labi sajauc.

Ir reizes, kad 1:20 atšķaidīšana nav pietiekama, lai skaitītu. Piemēram, pacientiem, kuri cieš no noteikta veida hroniskām leikēmijām. Šajos gadījumos jāveic lielāki atšķaidījumi, piemēram, 1: 100.

Ja, no otras puses, to skaits ir ļoti mazs, tāpat kā smagās leikopēnijas gadījumā, parauga koncentrēšanai var veikt mazākus atšķaidījumus. Piemērs: jūs varat veikt atšķaidīšanu 1:10.

Veiktās izmaiņas ietekmē aprēķinus.

Neubauera kameras montāža

Neubauera kameru saliek, novietojot hematometrisko priekšmetstikliņu centrālajā zonā. Abiem jābūt ļoti tīriem un sausiem. Lai ievietotu lameli, to paņem pa malām un viegli nomet uz kameru.

To piepilda, novietojot Thoma automātiskās pipetes vai pipetes galu 35 ° leņķī pie iekraušanas zonas malas. Šķidrums tiek izvadīts vienmērīgi, un iekraušanas laukumu piepilda kapilārs. Tas tiek darīts no abām pusēm, lai ielādētu abus šķērsgriezumus.

Tīklenes nedrīkst būt pārslogotas, un tām arī nevajadzētu liegt šķidrumu. Kravai jābūt precīzai. Ir svarīgi, lai pildījums tiktu veikts vienveidīgi, tas ir, nevajadzētu būt burbuļiem.

Kad kamera ir samontēta, to atstāj atpūsties 2 minūtes, lai šūnas nokristu apakšā, un to vizualizācija un skaitīšana būtu vieglāka.

Pēc atpūtas laika tas tiek uzstādīts uz gaismas mikroskopa skatuves novērošanai. Vispirms tas tiek fokusēts ar 10X objektīvu un, ja nepieciešams, pēc tam tiek pārsūtīts uz 40X.

Lai uzlabotu tā vizualizāciju, tiek samazināta gaismas caurlaidība no mikroskopa. Lai to izdarītu, kondensators tiek nolaists un diafragma ir nedaudz aizvērta.

Skaitīšana

Lai saskaitītu balto asins šūnu vai leikocītu daudzumu, jāatskaita visa četru vidējo stūra kvadrātu virsma un katra retikulāra laukuma centrālais laukums.

Skaitīšana sākas kvadrātā augšējā kreisajā stūrī. Jūs sākat no pirmās rindas pirmā laukuma, tas ir, no kreisās uz labo, līdz sasniedzat pretējo galu.

Tur jūs ejat lejā un skatāties atpakaļ no labās uz kreiso pusi, līdz sasniedzat otru galu un tā tālāk. Šūnas katrā režģī tiek skaitītas līkloču veidā. Tiek ieskaitīti 16 katra vidējā kvadrāta režģi.

Lai šūna netiktu skaitīta divreiz, ir noteikumi par šūnām, kas atrodas uz katra režģa robežlīnijām. Šūnas kreisajā un augšējā rindā tiek saskaitītas, un labās un apakšējās līnijas šūnas tiek ignorētas.

Ir jābūt pieejamam manuālajam šūnu skaitītājam, lai operators nospiestu ierīces taustiņu tik reižu, cik tiek novērotas šūnas. Izmantojot skaitītāju, operators var rēķināties, nemeklējot no mikroskopiskā lauka. Skaitīšanas beigās jūs redzēsit kopējo šūnu skaitu.

Aprēķini

Aprēķinus var veikt vairākos veidos. Var saskaitīt vienu gramatūru vai abas, un abām vidējā vērtība. Šajās divās situācijās saskaitītās šūnas jāreizina ar koeficientu, kas šajā gadījumā būtu 40. Un tādējādi ^{tiek iegūts} kopējais skaits uz mm ³ .

Bet, ja abus režģus saskaita un vidējo vērtību neņem, tad tas jāreizina ar citu koeficientu, šajā gadījumā ar 20.

-Pareizināšanas koeficients

Lūk, kā tiek aprēķināts reizināšanas koeficients.

Aprēķinos tiek ņemti vērā dažādi dati, ieskaitot atšķaidīšanas titru, kameras augstumu un saskaitīto laukumu.

Atšķaidīšana

Izmantotais standarta atšķaidījums ir 1:20 leikocītu skaitam.

Kameras augstums

Augstums starp kameru un asins šūnu lapu ir 0,1 mm.

Saskaitītā platība

Ja tiek ieskaitīti 5 kvadrāti ar 1 mm ² laukumu, tas nozīmē, ka kopējais skaitīšanas laukums ir 5 mm ² . Šie dati jāreizina ar kameras augstumu, lai iegūtu kopējo tilpumu. Tas ir, 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formulas un aprēķini

Ar mūsu rīcībā esošajiem datiem tiek teikts:

Ja 0,5 mm ³ - ir - tiek saskaitīts šūnu skaits

1 mm ³ --- būs - X šūnu skaits

X šūnu skaits = (šūnu skaits, kas ieskaitīts x 1) / 0,5 mm ³

Bet jāņem vērā arī atšķaidīšana. Tāpēc formula ir šāda:

(ieskaitīto šūnu skaits x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Visbeidzot, apkopojot, saskaitīto šūnu skaitu var reizināt ar 40. Tādējādi ^{tiek iegūta} leikocītu vērtība uz mm ³ .

Ja tiek saskaitīti abi tīkliņi, tiek mainīti skaitītā laukuma dati, kas šajā gadījumā būtu 10 kvadrāti, tas ir, 10 mm ² . Kopējais kopējais tilpums ir 1 mm3. Formula būtu šāda:

(ieskaitīto šūnu skaits x 1) x 20/1 mm ³

Tāpēc šajā gadījumā reizināšanas koeficients būtu 20.

Kļūdas

-Ja, ielādējot kameru, tas tiek pārsniegts vai pārsniegts ar šķidrumu, kameras augstums mainīsies. Tā rezultātā skaits ir lielāks nekā reālais. Ja mēģināt noņemt lieko daudzumu ar marli vai kokvilnu, tā ir milzīga kļūda. Šī darbība liks šūnām koncentrēties, palielinot to skaitu.

-Ja tas ir ielādēts slikti, to skaits būs mazāks nekā reālais.

-Ja kamera ir uzstādīta un ļauj tai nožūt, to vairs nav iespējams saskaitīt, jo tas sniegs nepareizus rezultātus.

-Ja parauga atšķaidījums pirms kameras ievietošanas nav labi sajaukts, pastāv kļūdas nolasīšanas risks, jo šūnas netiks sadalītas vienveidīgi. Tāpēc būs zemāka vai augstāka šūnu koncentrācija atkarībā no tā, vai paraugu ņem attiecīgi no šķidruma virsmas vai no mēģenes apakšas.

- Burbuļu klātbūtne samazina šķidruma daudzumu, kas jāievada retikulā, traucējot pareizu šūnu vizualizāciju un sadalījumu. Tas viss būtiski ietekmē rezultātus.

- Skaitīšanas laikā neizskatieties no mikroskopa, līdz katrs lielais kvadrāts nav pabeigts, lai nepazustu.

-Viena kļūda iemesls ir kameras noliešana pēc uzstādīšanas. Šī iemesla dēļ mikroskopa pakāpe ir rūpīgi jāpaaugstina.

Ieteikums

Ja kāda iemesla dēļ esat pamanījis novirzi kameras piepildīšanā, ieteicams šo izstrādājumu izjaukt, notīrīt kameru un no jauna salikt no jauna.

Tīrot kameru, rīkojieties ļoti uzmanīgi, lai nesaskrāptu krustu matus. No otras puses, ņemiet vērā, ka hematometriskais slaids ir smalks un trausls. Nepareiza darbība to var sabojāt.

Pirms sākat skaitīšanu, pārliecinieties, ka šūnas ir labi sadalītas. Nevienmērīgs šūnu sadalījums rodas no sliktas paraugu sajaukšanas vai atšķaidīšanas. Ja tas notiek, montāža ir jāatkārto.

Viens veids, kā uzzināt, vai šūnas ir labi sadalītas, ir, salīdzinot katra lielā kvadrāta skaitu, katrā kvadrātā saskaitīto šūnu skaitam nevajadzētu pārspīlēti atšķirties.

-Ja balto asins šūnu skaits pārsniedz 50 000 mm ^3, ieteicams to atkārtot, veicot lielāku atšķaidījumu.

-Ja maināt atšķaidījumu, jums ir jāpārrēķina reizināšanas koeficients, jo tas ietekmē formulu.

Atsauces

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Spermas koncentrācijas salīdzinājums, izmantojot Maklera kameru un Neubauera kameru. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Pieejams: scielo.
2. Neubauera kamera. (2018, 27. marts). Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. Apspriešanās datums: 04:10, 2019. gada 23. jūnijā no es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Alternatīvas skaitīšanas metodes pielietošana Neubauera kamerā, lai noteiktu Trichomonas vaginalis koncentrāciju. Cub Med Trop, 2001; 53 (3): 180–8. Pieejams vietnē: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Spermogrammas analīze. Venecu sv. Endokrinols. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Pieejams: ve.scielo
5. Karabobo Universitātes Bioanalīzes skolas hematoloģijas praktiskais ceļvedis. Venecuēla, 1998. gads