BIURETS: PAMATOJUMS, REAĢENTI, PROCEDŪRA, LIETOJUMI - BIOLOĢIJA - 2025

Biureta ir reaģents, ko izmanto proteīns noteikšanas garu ķēdi un īsā ķēdē. Īpaši to izmanto analītiskās ķīmijas un urīna analīžu jomā, lai izpētītu kopējo olbaltumvielu koncentrāciju serumā, plazmā un urīnā.

Noteiktu patoloģiju gadījumā olbaltumvielu vērtības var palielināt vai samazināt. Hipoproteinēmijas simptomi parasti rodas pacientiem ar nieru slimībām, pacientiem ar nepietiekamu uzturu un pacientiem ar hroniskām infekcijām.

Biureta reakcijā izveidotā kompleksa ķīmiskā struktūra Pozitīvs Biureta tests. Avots: Yikrazuul / flickr

Kaut arī hiperproteinēmija tiek novērota tādās patoloģijās kā multiplā mieloma, sistēmiskā sarkanā vilkēde, bakteriālais endokardīts, bakteriālais meningīts, Waldenstrom makroglobulinēmija, cita starpā.

No otras puses, olbaltumvielu klātbūtne urīnā ir saistīta ar albumīna filtrēšanu caur nierēm. Tā ir patoloģiska izturēšanās, kas ir jāizpēta.

Šajā ziņā Biurets ir ļoti noderīgs, jo tas ļauj daudzos citos paraugos noteikt proteīnu klātbūtni serumā, plazmā, urīnā.

Pat Biuretu var izmantot, lai izmeklētu olbaltumvielu klātbūtni un koncentrāciju slikti izpētītos paraugos vai nezināma sastāva paraugos. Tāpēc to plaši izmanto pētniecības jomā.

Biureta tests ir balstīts uz peptīdu saišu noteikšanu. Pārbaude notiek sārmainā vidē. Paraugam jābūt vismaz divām peptīdu saitēm, lai veidotos violeti violets komplekss. Kompleksu veido saišu un vara jonu savienība.

Pamats

Biureta reaģents sastāv no kālija hidroksīda, vara sulfāta un nātrija un kālija tartrāta. Nātrija hidroksīds tiek izmantots barotnes alkalizēšanai, jo šis nosacījums ir būtisks reakcijas norisei.

Vielas, kas reaģē ar olbaltumvielām, ir vara sulfāts, bet nātrija tartrāta funkcija neļauj veidot vara hidroksīdu, kam ir tendence izgulsnēties un kurš traucē reakciju.

Ja paraugā ir atrodamas vielas ar peptīdu saitēm (polipeptīdi vai olbaltumvielas), tests būs pozitīvs.

Reakcija tiek interpretēta kā pozitīva, ja šķīdums kļūst violets. Krāsu iegūst, veidojot kompleksu starp vismaz divām peptīdu saitēm, kurām ir CO-NH grupa, un vara katjoniem.

Violeto kompleksu var veidot divējādi: viens ir protonu zudums no amīdu grupām, kas saistās ar metālu (depronotācija), un otrs, pateicoties skābekļa un slāpekļa elektronu savienībai, kas ir brīvi un saistās. ar varu.

Šīs reakcijas intensitāte un krāsa var atšķirties atkarībā no olbaltumvielu veida.

Pārbaudi var veikt kvalitatīvi vai kvantitatīvi. Kvalitatīvā formā to paziņo kā pozitīvu vai negatīvu. Kaut arī kvantitatīvā formā koncentrāciju var izmērīt ar spektrofotometrisko metodi.

Reakciju nolasa diapazonā no 540 līdz 560 nm. Krāsas intensitāte ir tieši proporcionāla peptīdu saišu koncentrācijai paraugā.

Reaģenti

-20% nātrija hidroksīds (NaOH)

-Kupra sulfāta pentahidrāts 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Jaukts nātrija un kālija tartrāta tetrahidrāts (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biureta reaģenta stabilitāte

-Tas jātur atdzesēts.

Process

Tehnika

-Ielieciet mēģenē 100 μl analizējamā parauga vai standarta.

-Pievieno 2 ml nātrija hidroksīda.

-Miks ļoti labi.

-Pievienojiet 5 ml Biureta reaģenta.

- samaisiet un atstājiet 25 minūtes atpūsties istabas temperatūrā, pārklājiet un pasargājiet no gaismas.

- novērojiet krāsas veidošanos vai nē, un izmēriet spektrofotometriski.

Kalibrēšanas līkne

Liellopu seruma albumīnu var izmantot kā standartu kalibrēšanas līknes veikšanai. No tā tiek sagatavotas dažādas koncentrācijas. Piemēram, 25, 50, 75, 100, 125 un 150%.

Reakciju veic ar visām šīm zināmajām koncentrācijām, un absorbciju nolasa pie viļņa garuma 540 nm. Ar zināmo koncentrāciju datiem un absorbcijas rādījumiem izveido kalibrēšanas līkni.

Katrā apstrādāto paraugu noteikšanā vai partijā ieteicams uzstādīt standartu. Liellopu seruma albumīnu 0,1–2 mg / ml var izmantot kā kalibrēšanas standartu.

Mērījumus veic ar spektrofotometru pie 540 nm.

Linearitāte tiek sasniegta līdz koncentrācijai 12 g / dl.

Iejaukšanās

Vielas, kas traucē Biureta testu

Lai gan tas nav ļoti bieži, jāņem vērā, ka dažas vielas var traucēt šī testa izpildē. Piemēram, amonjaka klātbūtne var kavēt krāsas veidošanos.

Tāpat arī citas vielas varētu absorbēt tajā pašā viļņa garumā, piemēram, daži pigmenti.

No otras puses, traucējumus var radīt, ja viela, kas nav peptīda saite, veido kompleksu ar vara sāli. Piemērs: daži ogļhidrāti un daži lipīdi.

Ja analizējamajā paraugā ir kāda veida nogulsnes, pirms testa ievietošanas tas jāfiltrē vai centrifugē.

Vielas, kas netraucē Biureta testam

Pārbaudi neietekmē:

-Bilirubīns līdz koncentrācijai 20 mg / dl.

-Hemoglobīns līdz koncentrācijai 750 mg / dl.

-Dextran līdz koncentrācijai 30 g / L.

-Triglicerīdi līdz koncentrācijai 4000 mg / dl.

Priekšrocība

-Tā ir vienkārša izpildes metode.

-Tas ir ekonomisks pārbaudījums.

-Tam ir augsta olbaltumvielu specifika.

-Nelieli iejaukšanās.

Trūkumi

Tam ir zema jutība, lai noteiktu mazu olbaltumvielu daudzumu. Darbs, ko veikuši Fuentes et al., Apstiprina, ka Biureta testa metodei noteikšanas robeža ir 1 mg / ml olbaltumvielu un kvantitatīvā noteikšanas robeža ir 3 mg / ml.

Tomēr citi Amazones universitātē veiktie pētījumi ziņo par daudz zemākām vērtībām. Pētījumā uzrādītā noteikšanas robeža ir 0,020 mg / ml, un kvantitatīvās noteikšanas robeža ir 1,33 mg / ml.

Lietojumprogrammas

Biureta reaģentu vai testu izmanto olbaltumvielu noteikšanai klīniskajos un neklīniskajos paraugos ikdienas un pētniecības laboratorijās.

Patoloģijas, kas rodas, palielinoties vai samazinoties

Daudzās patoloģijās ir svarīgi noteikt kopējo olbaltumvielu koncentrāciju klīniskajos paraugos, kas var būt paaugstināta vai samazināta.

Tie ir paaugstināti:

-Daudzā mieloma,

-Sistēmiskā sarkanā vilkēde,

-Baktēriju endokardīts,

-Baktēriju meningīts,

Valdenstroma makroglobulinēmija, cita starpā.

To samazina:

-Renālu mazspēja,

-Cilvēki ar izteiktu nepietiekama uztura pakāpi,

-Cita starpā pacienti ar hroniskām infekcijām.

Klīniskie paraugi

Visizplatītākie klīniskie paraugi ir serums, plazma un urīns. Olbaltumvielu normālā vērtība serumā vai plazmā ir 6,0-8,8 gr / dl.

Olbaltumvielu koncentrācija urīnā pieaugušajiem nepārsniedz 150 mg / 24 stundas.

Urīna olbaltumvielu / kreatinīna līmeņa attiecība normā

Zīdaiņi: <0,50 mg

Bērni no 2 gadu vecuma: indekss: 0,20 mg

Pieaugušie: <0,2 mg

Neklīniski paraugi

Biureta reakciju var izmantot daudzu veidu neklīniskajiem paraugiem, piemēram, piena produktiem, antivenom vai jebkurai nezināmai vielai, kurai vēlaties izpētīt olbaltumvielu klātbūtni.

Atsauces

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Mangrovju austeres (Crassostrearizophorae) fizikāli ķīmiskais raksturojums un olbaltumvielu saturs šķidruma ekstraktos. Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Iegūts 2019. gada 26. jūnijā no vietnes http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Mango sēklu (Mangifera indica L.) mandeles funkcionālais raksturojums Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biurets." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 19. jūnijs, 16:37 UTC. 2019. gada 26. jūnijs, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, Garsija J. Biureta metodes standartizēšana, lai kvantitatīvi noteiktu olbaltumvielas polivalentā antiotropā serumā, kas ražots INS Nacionālajā bioloģisko produktu centrā. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Pieejams vietnē: repositorio.ins.gob.pe
5. Vīna laboratorijas. Kopējais olbaltumvielu daudzums. Kolorimetriskā metode kopējo olbaltumvielu noteikšanai serumā un plazmā. Pieejams vietnē: wiener-lab.com.ar