BAKTĒRIJU KULTŪRA: VEIDI, RAKSTUROJUMS, METODES, PRASĪBAS - BIOLOĢIJA - 2025

Baktēriju kultūra ir rezultāts sēšanas šo mikroorganismu par barības līdzekļu, lai par tiem vairoties, kā rezultātā izskatu baktēriju koloniju cietas medijos un miglainumu šķidrā medijos.

Sēšanas metode ir ļoti svarīga, lai spētu sadalīt sējmateriālu tādā veidā, lai klātesošās baktērijas būtu izkliedētas un varētu attīstīties pareizi izolētas kolonijas.

Dažādas kultūras, kuras autors iestādījis Karabobo universitātes Biomedicīnas un tehnoloģisko zinātņu ēkas bakterioloģijas laboratorijā. Avots: autora uzņemto fotogrāfiju sastāvs MSc. Marielsa Gil.

Kolonijas, kas iegūtas cietajā barotnē, ir iesēta mikroorganisma izplatības sekas. Katra kolonija sākas no vienas baktērijas, kas eksponenciāli var vairoties, veidojot makroskopiski redzamu populāciju.

Tas pats notiek šķidros barotnēs, bet šajā gadījumā baktēriju augšanu novēro duļķainība.

Baktēriju augšana ir iespējama, ja izvēlētā barotne atbilst barības un pH nosacījumiem, kas nepieciešami konkrētas baktērijas attīstībai. Turklāt ir jākontrolē citi mainīgie lielumi, piemēram, temperatūra, inkubācijas laiks, skābekļa koncentrācija, CO ₂ .

Ne visām baktēriju populācijām ir vajadzīgas vienādas prasības, lai gan dažas no tām var būt raksturīgas gandrīz visām, piemēram, ka barotne satur peptonus, tomēr taisnība ir arī tajā, ka ir arī prasīgāki mikroorganismi, kuriem papildus ir vajadzīgas citas īpašas vielas, ko sauc par augšanas faktoriem.

Piemēram, var minēt, ka dažiem Haemophilus augšanai nepieciešama X faktora (hemīna) un V faktora (NAD) klātbūtne.

Baktēriju kultūru veidi

Baktēriju kultūras var būt polimikrobiālas, tīras vai sajauktas.

Polimikrobu baktēriju kultūras

Polimikrobiālās kultūras ir tās, kas rodas, sējot paraugu, kas iegūts no vietas, kur ir normāla mikrobiota, kurā var atrast arī noteiktu patogēnu.

Piemērs: attīstot rīkles tamponu kultūru, var atrast tādu patogēnu kā Streptococcus pyogenes, bet tam pievienosies izplatīta mikrobiota šajā apgabalā.

Šajā gadījumā būtiska ir laba virpa, lai ļautu augt dažādu veidu baktērijām, kas atrodas izolēti.

Kolonijai, kurai raksturīgas īpašības, kas saderīgas ar Streptococcus pyogenes celmu, uzmanīgi pieskaras platīna cilpai un pēc tam stāda neapstrādātā barotnē un tādējādi iegūst tīru šī mikroorganisma kultūru.

Izmantojot šo tīro kultūru, var veikt visus testus, kas nepieciešami baktēriju identificēšanai.

Tīra baktēriju kultūra

Lai efektīvi identificētu mikroorganismus, ir jādarbojas no tīras kultūras.

Tīras kultūras var iegūt, tāpat kā iepriekšējā piemērā, pārstādot izolētu polimikrobu kultūras koloniju vai sējot paraugu, kas nāk no parasti sterilās vietas, un tajā ir tikai viens patogēns (atsevišķa augšana baktēriju tips). Piemērs: kad pacientam ar baktēriju meningītu tiek iesēta CSF.

Vēl viens veids ir atgriešanās no vecās tīras kultūras, lai iegūtu atjaunotu tīru kultūru.

Jauktas baktēriju kultūras

Šīs kultūras sastāv no mikroorganismu maisījuma, jo tie sastopami dabā. Dažos rūpniecības procesos ir ērti izmantot jauktas kultūras.

To var iegūt, apvienojot vairākas tīras kultūras, jo tās ļauj pētīt baktēriju savstarpējās attiecības.

Tie ir noderīgi, piemēram, ksenobiotiku noārdīšanai rūpnieciskajos notekūdeņos, jo tie darbojas kā bioloģiski noārdāmi līdzekļi.

Baktēriju kultūru raksturojums

Baktēriju kultūrās iegūto koloniju morfoloģiskās īpašības var būt ļoti dažādas.

Kolonijas var būt ļoti mazas, mērenas vai lielas, un tās var parādīties sausas vai mucoid, spīdīgas vai blāvas. Atkarībā no tekstūras tas var mainīties starp gludu un raupju, un atkarībā no formas tie var būt apaļi, plakani, izliekti.

Atkarībā no krāsas tie var būt bezkrāsaini, balti, dzelteni, rozā, fuksijas, sarkani, oranži, smilškrāsas, pelēcīgi, zaļgani, brūni, melni vai ar metāla spīdumu, atkarībā no iesaistītajām baktērijām un izmantotās barotnes.

Koloniju robežas var būt regulāras vai neregulāras. No otras puses, citi var parādīt vienveidīgu plēvi, kas tiek izplatīta gandrīz visā vidē, ko sauc par "spiešanu". Tas ir raksturīgi Proteus sp.

Dažas baktēriju kultūras izdala smakas, kas ir diezgan raksturīgas iesaistītajām sugām. Piemēram, Pseudomonas aeruginosa kultūrai ir raksturīga augļu smarža, savukārt Proteus ģintij ir raksturīga sīva smarža.

Koloniju piemēri pēc to lieluma

Īpaši mazs: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.

Mazs: Streptococcus sp, Enterococcus sp.

Mērens: ģimenes Enterobacteriaceae

Liels: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.

Koloniju piemērs pēc to izskata

Sauss: Lactobacillus confusus.

Gļotādas: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Brilliant: Klebsiella pneumoniae.

Necaurspīdīgi: Enterococcus faecalis, daži Neisseria gonorrhoeae celmi.

Koloniju piemēri pēc to struktūras

Gludās kolonijas: Micrococcus luteus

Neapstrādātas kolonijas: Sarcina ventriculi uz barības vielu agara.

Koloniju piemērs pēc formas

Apkārtraksti: Listeria murrayi un Micrococcus luteus uz barības vielu agara.

Dzīvoklis: Staphylococcus equorum uz barības agara.

Izliekts: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae.

Koloniju piemērs atbilstoši to robežām

Noapaļota mala: Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

Neregulāra robeža: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Lobētās malas: Bacillus sp.

Koloniju piemērs pēc to krāsas

Caurspīdīgs vai bezkrāsains: Shigella sp uz XLD agara.

Balts: Staphylococcus hominis uz asins agara.

Bēšs: Bacillus sphaericus un Lactobacillus confusus uz barības agara.

Dzeltens: Staphylococcus aureus un Elizabethkingia meningoseptica uz asins agara, Pediococcus sp, Staphylococcus lentus uz barības agara,

Rozā: Escherichia coli uz XLD agara, Micrococcus roseus uz barības agara.

Fuksija: Escherichia coli uz Mac Conkey agara.

Violets: Chromobacterium violaceum.

Sarkanīgi: Serratia marcescens istabas temperatūrā uz barības agara.

Oranžs: Kurthia zopfii uz barības vielu agara.

Pelēcīgi: Sporosarcina urīnviela augsnes ekstrakta agarā.

Zaļgani: Pseudomonas aeruginosa uz BHI agara.

Brūns: Enterococcus sp uz žults eskulīna agara.

Melns: Salmonella enteritidis uz SS agara.

Ar metālisku spīdumu: Escherichia coli uz Endo agara.

Baktēriju audzēšanas metodes

Fakultatīvā aerobā vai anaerobā baktēriju kultūra

Tā ir visplašāk izmantotā audzēšanas metode. Tas ir saistīts ar faktu, ka, pirmkārt, lielākajai daļai baktēriju, kas ir patogēnas cilvēkam, ir aerobās vai fakultatīvās anaerobās; un, otrkārt, tas ir daudz lētāk un vienkāršāk nekā anaerobās kultūras. Piemērs: attiecīgi Mycoplasma pneumoniae un Escherichia coli.

Anaerobā baktēriju kultūra

Šāda veida kultūrai nepieciešama pilnīga skābekļa nomākšana. Anaerobās baktērijas barotnēs parasti vajadzētu būt reducējošām vielām, piemēram: askorbīnskābei, tioglikolātam, cisteīnam vai sēram, lai novērstu gaisā esošā skābekļa toksisko iedarbību.

Daži no tiem satur tādus indikatorus kā resazurīns, kas skābekļa klātbūtnē ir zils un anaerobiozes gadījumā bezkrāsains. Piemērs: Clostridium tetani.

Baktēriju kultūra mikroaerofilijā

Kultūras plāksnes ievieto mikroaerofilā kapucē ar iedegtu sveci, pārklāj. Svece patērē skābekli un izdziest. Šajā stāvoklī aug dažas baktērijas, piemēram, Streptococcus sp.

Materiāli un prasības

materiāli

Materiāli, kas nepieciešami baktēriju kultivēšanai, ir: Petri trauki vai mēģenes ar barotni vai buljonu, platīna cilpa, paraugs, Bunsena deglis vai krāsns.

Prasības baktēriju kultūras veikšanai

Baktēriju kultūrai ir nepieciešami daudzi elementi, kas jāņem vērā, piemēram, barības vielas barotnē, pH, temperatūra, skābekļa koncentrācija, CO2, mitrums.

Uzturvielas

Baktēriju kultūrām nepieciešami barotnes, kas satur makroelementus un mikroelementus. Starp makroelementiem var minēt tādas organiskas vielas kā peptoni, aminoskābes, ogļhidrātus kā oglekļa un slāpekļa avotus.

Starp mikroelementiem cita starpā ir neorganiskas vielas vai mikroelementi - mangāns, cinks, niķelis, bors, hlors, selēns, silīcijs, kobalts, varš.

Ūdeņraža jonu koncentrācija (pH)

Ūdeņraža jonu (H ⁺ ) un hidroksiljonu (OH ^- ) koncentrācija barotnē, kurā attīstīsies kultūra, ir vitāli svarīga, jo tie nosaka pH.

Visbiežāk izmantotais pH ir neitrāls (pH = 7,0), tomēr var būt arī līdzekļi, kur skābs vai sārmains pH ir ērts, piemēram, ja vēlaties izolēt attiecīgi acidofilās vai alkalifofilās baktērijas.

Temperatūra

Temperatūra ir ļoti svarīgs faktors, kas ietekmē baktēriju kultūru augšanu. Baktērijas var būt psirofilas (augt temperatūrā zem 20 ° C, mezofīlas (no 20 ° C līdz 42 ° C), termofīlas (no 40 ° C līdz 70 ° C), hipertermofīlas (70 ° C - 105 ° C).

Skābekļa nepieciešamība

Aerobās: tās aug skābekļa klātbūtnē.

Mikroaerofīli: tie aug 5-10% CO ₂ klātbūtnē _.

Stingri anaerobi: aug, ja nav skābekļa.

Fakultatīvie anaerobi: aug skābekļa klātbūtnē vai bez tā.

Aerotolerants: tie labi aug bez skābekļa un panes maz skābekļa.

Kultūras nesēji

Barotnes ir speciāli uztura preparāti, kurus sagatavo laboratorijā, lai iegūtu mikrobu augšanu vai kultūru. Šiem barotnēm ir atšķirīga konsistence, sastāvs un funkcijas. Katra laboratorija sagatavos viņu vajadzībām atbilstošu barotnes tipu.

Baktēriju kultūras kolekcija

Ir iestādes vai organizācijas, kas nodarbojas ar klīniski, vides vai rūpnieciski nozīmīgu baktēriju celmu savākšanu, raksturošanu, uzturēšanu un izplatīšanu.

Šos celmus izmanto pētniecības darbam un barotnes kvalitātes kontrolei.

Piemērs: celmi Amerikas tipa kultūras kolekcija, Venecuēlas Mikroorganismu savākšanas centrs (CVCM) un Cubas Nacionālā higiēnas, epidemioloģijas un mikrobioloģijas institūta (INHEM) celmi.

Atsauces

1. Benavides G, Hermida A. Vietējo baktēriju floras izolēšana un identificēšana no Krusas Verdes un Guasca páramos augsnes. (Cundinamarca). 2008. Bogota. Pieejams vietnē: javeriana.edu.co/biblos
2. Hanss S. Vispārīgā mikrobioloģija. Omega izdevumi. 1991. Barselona, ​​Spānija. Pieejams vietnē: biolprocariotas.files
3. Weng Z, Junco R, Díaz R. Mikrobu kultūru kolekcija: piezīmes par to attīstību. Cubana Hig Epidemiol, 2003; 41 (1). Pieejams vietnē: scielo.sld.cu/scielo.
4. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.